使用荧光素激活的蛋白质标记追踪酵母信息素受体Ste2内吞作用
摘要：酵母信息素受体Ste2的内部化能被荧光显微镜实时观察。我们仅在激动剂参与时在细胞表面可见，而不是在细胞总体池中。我们在其N-端标记了一个胞外荧光原活化蛋白（FAP）来可视化这个受体。FAP是一个单链抗体，经过工程设计可以紧密结合非荧光、不可渗透细胞的染料（荧光原），从而生成一个荧光复合物。此前尚未研究过在酵母中标记FAP的有机质膜蛋白的运输。探索了一系列不同的信号肽和前肽序列来最大化表达。维持最佳的FAP-Ste2嵌合体的完整性需要删除两个类似物的糖脂磷脂酰肽（GPI）锚定的胞外天冬氨酸蛋白酶（Yps1和Mkc7）。FAP-Ste2显示出比Ste2-GFP或Ste2-mCherry更亮、更明显的质膜信号，但行为相似。使用FAP-Ste2获得了关于其内化机制的新信息，包括有关货物选择性内吞适应体Ldb19/Art1、Rod1/Art4和Rog3/Art7作用的新见解。
作者：Anita Emmerstorfer-Augustin, Christoph M. Augustin, Shadi Shams, Jeremy Thorner
论文ID：1901.06956
分类：Cell Behavior
分类简称：q-bio.CB
提交时间：2019-01-23