聚合酶链反应微阵列技术实现多重靶标的定性与定量同时识别
摘要：一种用于多重定性和定量微阵列PCR分析的方法已被提出。研究了在基于凝胶的寡核苷酸微阵列上执行的PCR的特性，其中含有固定的向前引物和溶液中单一的共同向后引物。研究了一阶段多重定性芯片PCR，用于同时扩增单纯疱疹病毒1型和2型、巨细胞病毒DNA和噬菌体lambda DNA作为内部对照。此外，还在两阶段的测定版本中联合分析了增加的靶标数量（添加沙眼衣原体、人类支原体和尿道支原体DNA）：第一阶段是采用专用引物进行管内PCR，反向引物含有5'-适配子区域；第二阶段是采用固定的靶标特异性向前引物和适配子作为共同的溶液中向后引物进行芯片扩增。还通过使用溶液中含有常见的聚T引物，展示了一阶段反应在人类cDNA分析中的可能应用。SYBR Green I和Cy-5标记的dUTP被用于实时和终点检测特定PCR产物。结果表明，一阶段和两阶段反应的效率均强烈依赖于镁离子和引物浓度。使用噬菌体lambda DNA的10倍系列稀释研究了两个版本的定量PCR。该方法能够检测到每个反应中的6个DNA拷贝，一阶段反应的定量区间涵盖了8个浓度量级。讨论了凝胶垫尺寸对微阵列PCR效果的显著影响。
作者：Natalia V Zakharova, Alexei L Drobyshev, Dmitry A Khodakov, Anna I Myznikova, Irina A Gorban
论文ID：0811.1263
分类：Quantitative Methods
分类简称：q-bio.QM
提交时间：2009-01-22